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廣州生物院利用CRISPR/Cas9技術成功建立基因敲除克隆豬
betway体育下载 研究員、吉林大學教授賴良學博士的研究團隊利用最新的CRISPR/Cas9基因敲除技術成功地培育出兩種基因敲除克隆小型豬,即酪氨酸酶基因敲除豬和PARK2和PINK1雙基因敲除豬,建立了人類白化病和帕金森綜合征兩種豬模型,該研究成果於10月2日在線發表在細胞分子生命科學(Cellular and Molecular Life Sciences)上。
課題組楊化強博士、博士研究生周小青和信吉閣,針對豬的酪氨酸酶、PARK2和PINK1基因的外顯子設計了Cas9 打靶質粒,將其分別轉染版納小型豬的胎兒成纖維細胞和巴馬小型豬的胎兒成纖維細胞後,獲得了純合的酪氨酸酶基因敲除以及PARK2和PINK1雙基因敲除的細胞係。細胞係用於體細胞核移植後獲得15頭酪氨酸酶基因敲除克隆豬,20頭PARK2和PINK1雙基因敲除克隆豬。酪氨酸酶基因敲除後,本為黑色的版納小型豬,變成了白豬,表現出了典型的白化病特征;而缺失PARK2和PINK1雙基因的敲除克隆豬可以作為帕金森症大動物模型,用於研究其發生機製和評估相關治療藥物的有效性和安全性。
賴良學研究團隊長期從事豬等大動物的基因修飾研究,曾率先利用鋅指核酸酶、TALEN等基因打靶技術成功製作多種基因修飾豬。本次研究又將新興的CRISPR/Cas9技術與體細胞克隆相結合,不僅使豬基因打靶效率更高、更為精確,而且在一個世代內首次實現了大動物雙基因的等位敲除。該技術路線的建立將大大加速多基因修飾豬製備,對農業而言,可促進豬的生產性能的改良;對於生物醫藥領域,也可加速大動物疾病模型的建立和異種器官移植研究進展。

黑色豬和白色豬

缺失PARK2和PINK1雙基因的敲除克隆豬
